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加拿大BioBasic 公司研發合成oligo的特殊技術HAP (High Affinity Purification),是其原理是將oligo合成原液通過HAP column,含DMT保護基的完整oligo (DMT-ON-Oligo) 將會選擇性地與resin結合,而長度較短不完整的oligo就會直接通過column而去除。最後在微酸的條件下移除DMT保護基而得到完整的長度的oligo。 |
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具有以下優點: |
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- 高純度:HAP純化純度可大於98%,遠大於de-salted oligo (只有30%: 60-mer到68%: 20-mer )
- 經濟實惠:與HPLC相當純度但價格同於desalt的純化收費。
- 附有電泳分析圖:每條primer data sheet上皆附有電泳分析圖, 且每條primer原廠都有留下少許樣品,使用上如有問題,可要求原廠做QC確認。
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純化方式:
HAP:建議於 < 60 mer 的primer,適用PCR 或定序實驗,純度 > 98%。
PAGE:適用於長鏈 > 60 mer,PCR 或定序實驗,純度 > 99%。
HPLC:適用於 PCR、定序或作為探針用途,純度 > 99%。 |
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| 混合核酸對照表 |
| R |
A/G |
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H |
NOT G |
| Y |
T/C |
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B |
NOT A |
| M |
A/C |
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D |
NOT C |
| K |
T/G |
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V |
NOT T |
| S |
G/C |
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N |
A/T/G/C |
| W |
A/T |
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特殊標記修飾:(免費MASS QC test)
1.單一修飾:有多種標定或螢光修飾,位置可在 3'端或5'端,請參考標定修飾表。 |
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| 標定分子型式 |
標定位置 |
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標定分子型式 |
標定位置 |
| Phosphorothioate |
any |
Phosphorylation |
3' , 5' |
| dU or dI |
any |
FAM |
3' , 5' |
| Amine Modification |
3' , 5' |
TET or HEX |
3' |
| Biotin |
3' , 5' |
TAMRA or Rox |
3' , 5' |
| Dig |
3' , 5' |
Cy3 or Cy5 |
5' |
| SH or HS-SH |
3' , 5' |
JOE |
3' , 5' |
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2.雙重標定:在序列兩端標定螢光分子。 |
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| 標定分子型式 |
純化方式 |
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標定分子型式 |
純化方式 |
| 5' FAM - 3' TAMRA |
2次HPLC |
5' FAM - 3' Dabcyl |
PAGE+ HPLC |
| 5' TET- 3' TAMRA |
2次HPLC |
5' HEX - 3' Dabcyl |
PAGE+ HPLC |
| 5' HEX - 3' TAMRA |
2次HPLC |
5' ROX - 3' Dabcyl |
PAGE+ HPLC |
| 5' FAM - 3' BHQ-1 |
PAGE+ HPLC |
5' FAM - 3' ECLIPSE |
PAGE+ HPLC |
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